DNAブロット法 の変更点

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*DNAブロット法[DNA-blotting]
　 サザンブロット法ともいい，もともと1975年にSouthernによって導入されたDNA分析法．DNAを制限酵素によって切断したのち，ゲル電気泳動によって分離し，その後，毛管現象によってニトロセルロースやナイロン製のフィルター膜に転写することにより，分離されたDNAをそのまま膜上に固定する．初期には，DNAをアルカリ変性して一本鎖にしたものを中和後，ニトロセルロース膜に固定していたが，現在では，アルカリ性のままで，プラスに荷電したナイロン膜に吸着させ，その後，中和する方法(アルカリブロット法)が一般的である．この膜上に固定されたDNAに対して，放射ラベルまたはDIG (digoxy-genin)などでラベルしたDNAプローブを用いてハイブリダイゼーションを行うと，プローブと同一の塩基配列をもつDNA断片にプローブが結合するので，目的とする特定のDNAの泳動パターンを知ることができる．ハイブリダイゼーションや洗浄の条件を変える(厳密度の低い条件にする)ことにより，完全に同一ではない類似配列も検出できる． DNAブロット法は，クローン化したDNAのマッピングのほか，ゲノム中の遺伝子のコピー数の推定などに使われる．また，応用として，遺伝子長多型(RFLP)などの制限酵素サイト多型分析がある．